
<html><head><meta http-equiv="content-type" content="text/html; charset=us-ascii"></head><body style="overflow-wrap: break-word; -webkit-nbsp-mode: space; line-break: after-white-space;"><div><br></div><div>Dear James,</div><div><br></div><div>Certainly the image you showed contains burned samples, either because the dose you are using is too high (I don't really believe that, because all the carbon that surrounds the holes in the lacey grid doesn't look burned / marked), but it could be that the thickness of the ice is too thin for the size of those particles that are close to or larger than 500 nm. </div><div><br></div><div>Another indication that the thickness of the ice is too thin for this sample size is the location of the particles near the edges of the holes (thinner ice in the center of the hole pushes particles closer to the edges with thicker ice).</div><div><br></div><div>Maybe you can try thickening the ice a bit and comparing. </div><div>Another point is the concentration that really seems low, perhaps with a greater thickness of ice more particles stay in the holes or a higher concentration would be necessary. </div><div><br></div><div>You can also leave a time (5 to 30s - called wait time) between applying the sample to the grid and blotting before dipping in ethane, so that the sample "settles" in the holes. For some samples this really helps, for others it doesn't matter.</div><div><br></div><div>Here is an article with several tips and observations for studying particles like yours. The article is from 2011, but it's still very good.</div><div><br></div><div>Best, </div><div>Alexandre </div><div><br></div><div></div></body></html>