<div dir="ltr">Hey Sasha,<div><br></div><div>Try H2, O2 Plasma Cleaning for 30S in each case. If you see good particles in Negative stains. </div><div><br></div><div>I hope you are doing plasma cleaning before coating GO, if not then try following protocol from Eva Nogales lab.</div><div><br></div><div>Best,<br clear="all"><div><div dir="ltr" class="gmail_signature" data-smartmail="gmail_signature"><div dir="ltr"><div>Rajiv Ranjan Singh</div><div><br></div></div></div></div><br></div></div><br><div class="gmail_quote"><div dir="ltr" class="gmail_attr">On Tue, Oct 11, 2022 at 4:47 AM SSS Sasha <<a href="mailto:sss_jiandan@outlook.com">sss_jiandan@outlook.com</a>> wrote:<br></div><blockquote class="gmail_quote" style="margin:0px 0px 0px 0.8ex;border-left:1px solid rgb(204,204,204);padding-left:1ex"><div class="msg1457054943890267078">




<div dir="ltr">
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
Dear all,</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<br>
</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
I was trying to freeze cryo EM grids for a protein ~ 0.73MDa under several conditions, but it didn't work well. I make a brief summary here. Does anyone have any suggestions? Thanks in advance!</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<br>
</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
Holly grids CF-1.2/1.3-4Cu-50: plasma cleaning for 10s using O2,Ar2            Protein can't go in to the hole</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<br>
</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
Lacey carbon 400mesh Cu:  plasma cleaning for 15s using O2, Ar2        Contrast is quite low, hardly see the particles</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<br>
</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
GO on Quantifoil: <span style="background-color:rgb(255,255,255);display:inline">plasma cleaning for 15s using H2, O2              Protein can't go into hole</span></div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<span style="background-color:rgb(255,255,255);display:inline"><br>
</span></div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<span style="background-color:rgb(255,255,255);display:inline">Best regards,</span></div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<span style="background-color:rgb(255,255,255);display:inline">Shasha</span></div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<img style="max-width: 100%;" size="5558029" src="cid:183c3cfb9ffd2a6827e1"><br>
</div>
</div>

_______________________________________________<br>
3dem mailing list<br>
<a href="mailto:3dem@ncmir.ucsd.edu" target="_blank">3dem@ncmir.ucsd.edu</a><br>
<a href="https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem" rel="noreferrer" target="_blank">https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem</a><br>
</div></blockquote></div>