<div dir="ltr">Hey Sasha,<div><br></div><div>If you need, I can send you my protocol revised based on Eva Nogales lab and protocol provided by <span style="color:inherit;font-family:inherit;font-size:inherit;font-style:inherit;font-variant-ligatures:inherit;font-variant-caps:inherit;font-weight:inherit">Matthew Belousoff</span><span style="color:inherit;font-family:inherit;font-size:inherit;font-style:inherit;font-variant-ligatures:inherit;font-variant-caps:inherit;font-weight:inherit"> (</span><span style="color:rgb(0,0,0)">Monash University). This covers almost 60-70 of the holes on UltraAufoil grids!!</span><div class="gmail-Kcr4m" style="border:0px;font-variant-numeric:inherit;font-variant-east-asian:inherit;font-stretch:inherit;font-size:14px;line-height:inherit;margin:0px;padding:0px;vertical-align:baseline;color:rgb(50,49,48);display:flex"><div class="gmail-zIi_0" style="border:0px;font:inherit;margin:0px;padding:0px;vertical-align:baseline;color:inherit;min-width:0px"><div class="gmail-BeMje gmail-AKK3a gmail-bf4PE" style="border:0px;font-style:inherit;font-variant:inherit;font-stretch:inherit;line-height:inherit;font-family:inherit;margin:0px;padding:0px;vertical-align:baseline"><div class="gmail-uCLpU" style="border:0px;font:inherit;margin:0px;padding:0px;vertical-align:baseline;color:inherit;overflow:hidden;white-space:nowrap;width:1022.29px"><br class="gmail-Apple-interchange-newline"></div></div></div></div><div>Best,</div><div><div><div dir="ltr" class="gmail_signature" data-smartmail="gmail_signature"><div dir="ltr"><div>Rajiv Ranjan Singh</div><div><br></div></div></div></div></div></div></div><br><div class="gmail_quote"><div dir="ltr" class="gmail_attr">On Tue, Oct 11, 2022 at 9:32 AM SSS Sasha <<a href="mailto:sss_jiandan@outlook.com">sss_jiandan@outlook.com</a>> wrote:<br></div><blockquote class="gmail_quote" style="margin:0px 0px 0px 0.8ex;border-left:1px solid rgb(204,204,204);padding-left:1ex">



<div style="overflow-wrap: break-word;">
Hi Ryan and Rajiv,
<div><br>
</div>
<div>Thanks for those suggestions. Yes, I think there are some problems with GO. I will try optimize it. </div>
<div><br>
</div>
<div>Thanks so much!</div>
<div>Shasha<br>
<div>
<div><br>
<blockquote type="cite">
<div>On Oct 10, 2022, at 4:05 PM, Ryan Abdella <<a href="mailto:abdel104@umn.edu" target="_blank">abdel104@umn.edu</a>> wrote:</div>
<br>
<div>
<div style="overflow-wrap: break-word;">
Hi Sasha,
<div><br>
</div>
<div>To add to what Rajiv said, it’s not clear from your image that there is even GO coating the hole that you are imaging. If have you a lot of GO on your grid, then you should see lines in your images representing the edges of GO sheets (see attached
 image for an egregious example). If you don’t have much GO on your grid, an atlas of a square should indicate that holes appear different (GO covered areas are usually darker) depending on the presence/absence of GO.</div>
<div><br>
</div>
<div>Best,</div>
<div>Ryan</div>
<div><br>
</div>
<div><span id="m_-8270406222351359927cid:57DDFCD2-B950-458B-A567-202A0A0A9BB9"><GO_grid.png></span><br>
<div><br>
<blockquote type="cite">
<div>On Oct 10, 2022, at 4:36 PM, Rajiv Ranjan Singh <<a href="mailto:rajssai@gmail.com" target="_blank">rajssai@gmail.com</a>> wrote:</div>
<br>
<div>
<div dir="ltr">Hey Sasha,
<div><br>
</div>
<div>Try H2, O2 Plasma Cleaning for 30S in each case. If you see good particles in Negative stains. </div>
<div><br>
</div>
<div>I hope you are doing plasma cleaning before coating GO, if not then try following protocol from Eva Nogales lab.</div>
<div><br>
</div>
<div>Best,<br clear="all">
<div>
<div dir="ltr">
<div dir="ltr">
<div>Rajiv Ranjan Singh</div>
<div><br>
</div>
</div>
</div>
</div>
<br>
</div>
</div>
<br>
<div class="gmail_quote">
<div dir="ltr" class="gmail_attr">On Tue, Oct 11, 2022 at 4:47 AM SSS Sasha <<a href="mailto:sss_jiandan@outlook.com" target="_blank">sss_jiandan@outlook.com</a>> wrote:<br>
</div>
<blockquote class="gmail_quote" style="margin:0px 0px 0px 0.8ex;border-left:1px solid rgb(204,204,204);padding-left:1ex">
<div>
<div dir="ltr">
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt">
Dear all,</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt">
<br>
</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt">
I was trying to freeze cryo EM grids for a protein ~ 0.73MDa under several conditions, but it didn't work well. I make a brief summary here. Does anyone have any suggestions? Thanks in advance!</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt">
<br>
</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt">
Holly grids CF-1.2/1.3-4Cu-50: plasma cleaning for 10s using O2,Ar2            Protein can't go in to the hole</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt">
<br>
</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt">
Lacey carbon 400mesh Cu:  plasma cleaning for 15s using O2, Ar2        Contrast is quite low, hardly see the particles</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt">
<br>
</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt">
GO on Quantifoil: <span style="background-color:rgb(255,255,255);display:inline">plasma cleaning for 15s using H2, O2              Protein can't go into hole</span></div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt">
<span style="background-color:rgb(255,255,255);display:inline"><br>
</span></div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt">
<span style="background-color:rgb(255,255,255);display:inline">Best regards,</span></div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt">
<span style="background-color:rgb(255,255,255);display:inline">Shasha</span></div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt">
<span id="m_-8270406222351359927cid:183c3cfb9ffd2a6827e1"><Screen Shot 2022-10-10 at 1.31.48 PM.png></span><br>
</div>
</div>
_______________________________________________<br>
3dem mailing list<br>
<a href="mailto:3dem@ncmir.ucsd.edu" target="_blank">3dem@ncmir.ucsd.edu</a><br>
<a href="https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem" rel="noreferrer" target="_blank">https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem</a><br>
</div>
</blockquote>
</div>
_______________________________________________<br>
3dem mailing list<br>
<a href="mailto:3dem@ncmir.ucsd.edu" target="_blank">3dem@ncmir.ucsd.edu</a><br>
<a href="https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem" target="_blank">https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem</a><br>
</div>
</blockquote>
</div>
<br>
</div>
</div>
</div>
</blockquote>
</div>
<br>
</div>
</div>
</div>

</blockquote></div>