<div dir="ltr">Dear Adam<div><br></div><div>I attach a protocol that Louise Fairall here at Leicester developed a few years ago. You could just use the same buffer for SEC of your protein. Good concentrations range between 2-4 mg/ml depending on how concentrated you want the particles on your grids. Having a protein source with either the light or heavy chain will give you a better result.</div><div><br></div><div>Best wishes</div><div><br></div><div>Christos</div></div><br><div class="gmail_quote"><div dir="ltr" class="gmail_attr">On Wed, Feb 16, 2022 at 4:55 PM Adam Schröfel <<a href="mailto:adam.schrofel@gmail.com">adam.schrofel@gmail.com</a>> wrote:<br></div><blockquote class="gmail_quote" style="margin:0px 0px 0px 0.8ex;border-left:1px solid rgb(204,204,204);padding-left:1ex"><div dir="auto">Hello 3DEMers,<div dir="auto">I am wondering if there is any reliable way to prepare apoferritin particles for microscope benchmarking and acquisition tuning.</div><div dir="auto">I've got a A3660 Apoferritin from the equine spleen from Sigma in 50% glycerol which is probably the most common source. Is there any protocol on how to process the protein? What buffer type I should use and how to get rid of glycerol - dialysis, gel filtration? What is the best concentration to use, the grid type, etc.? I read some protocols and papers, but the processing relatively differs one from another or the protocol is not perfectly clear to me.</div><div dir="auto">Thanks for any suggestions!</div><div dir="auto">Best regards</div><div dir="auto"><br></div><div dir="auto">Adam</div><div dir="auto"><br></div><div dir="auto">Adam Schröfel</div><div dir="auto"><br></div><div dir="auto">Department of Cell Biology | Biocev</div><div dir="auto"><br></div><div dir="auto">Charles University</div><div dir="auto"><br></div><div dir="auto">Prumyslova 595, 252 50 Vestec</div><div dir="auto"><br></div><div dir="auto">Prague West, Czech Republic</div><div dir="auto"><br></div><div dir="auto"><a href="https://urldefense.proofpoint.com/v2/url?u=https-3A__www.rozbeskylab.org&d=DwMFaQ&c=-35OiAkTchMrZOngvJPOeA&r=L7-zyQ-04fFCMRqzLIOnx7H0exGZHwIQe_wMPuY600I&m=6MkD4OcM47n4WfsQ9lwuh3DkNdFbKoMI0i8-mxEs6zZJXxhAG2nwpOAOm2YzSK1O&s=TCdxlKXdhVF7t8oiZpGQHYdboypontMVDcHWauHNROY&e=" rel="noreferrer" target="_blank">https://www.rozbeskylab.org</a></div><div dir="auto"><br></div><div dir="auto"><br></div><div dir="auto"><br></div><div dir="auto"><br></div><div dir="auto"><br></div></div>
_______________________________________________<br>
3dem mailing list<br>
<a href="mailto:3dem@ncmir.ucsd.edu" target="_blank">3dem@ncmir.ucsd.edu</a><br>
<a href="https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem" rel="noreferrer" target="_blank">https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem</a><br>
</blockquote></div>