<div dir="ltr">Hi Linda<div>I have used 1% GA for fixing  BSL3 viruses for cryo-EM. Resultant single particle resolutions ranged between 7-9 angstrom. A have also used 2% GA while fixing BSL3 virus infected cells for HPF followed by thin section TEM. If you are fixing mammalian cells intended for HPF, i would very strongly recommend not centrifuging them for >500g at any time during fixation or further washes, even ~200g if you can go that low. GA helps preserve ultrastructure for sure but I would recommend leaving your sample in the fixative only for the minimum essential amount of time. There are several reports out there with time recommendations.</div><div><br></div><div>If you need further details of the protocols here are links - </div><div>1) <a href="https://urldefense.com/v3/__https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fcimb.2020.580339/full__;!!Mih3wA!TMDW6o_cpZIwgUlq8Ekweus0ftgX0bj6FrhPvLkrP1M30CrZe6d64_bZErBdSi4cVA$">https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fcimb.2020.580339/full</a> - <b>for HPF</b><br></div><div>2) <a href="https://urldefense.com/v3/__https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0166093419304173__;!!Mih3wA!TMDW6o_cpZIwgUlq8Ekweus0ftgX0bj6FrhPvLkrP1M30CrZe6d64_bZErBQcnm7Kw$">https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0166093419304173</a> - <b>for inactivation of viruses intended for cryo-EM/cryo-ET</b></div><div><br></div><div>P.S. - I have never used PFA and I have never done CLEM so I dont know how that would affect either fixation or fluorescence experiments. </div><div><br></div><div>Good luck!</div><div>Amar</div><div><br></div></div><br><div class="gmail_quote"><div dir="ltr" class="gmail_attr">On Mon, Jan 18, 2021 at 3:19 AM Linda Sandblad <<a href="mailto:linda.sandblad@umu.se">linda.sandblad@umu.se</a>> wrote:<br></div><blockquote class="gmail_quote" style="margin:0px 0px 0px 0.8ex;border-left:1px solid rgb(204,204,204);padding-left:1ex"><div style="overflow-wrap: break-word;">Dear best colleagues!<div><br></div><div><div>What chemical fixation protocols works for your projects before plunge freezing (or HPF) or what typs of chemical fixation was not good (destroyed more than it helped) prior to cryo-EM sample preparation?</div><div><br></div><div>Im interested in your experiences, also happy if you have adressed this question in a article and would like to share the link with me.</div><div><br></div><div>For cryo-EM we prefer to work as close to native as possible, avoiding chemical fixations, but sometimes a fixation is needed to test or move on with tricky projects. For examples, when bacteria cultures are tricky and samples need to be stored, or when bio safety restricts work in the EM labs (lab specific and different).</div><div><br></div><div>Best regards, Linda</div><div><br></div><div><div>
<div dir="auto" style="color:rgb(0,0,0);letter-spacing:normal;text-align:start;text-indent:0px;text-transform:none;white-space:normal;word-spacing:0px;text-decoration:none"><div dir="auto" style="color:rgb(0,0,0);letter-spacing:normal;text-align:start;text-indent:0px;text-transform:none;white-space:normal;word-spacing:0px;text-decoration:none"><div dir="auto" style="color:rgb(0,0,0);letter-spacing:normal;text-align:start;text-indent:0px;text-transform:none;white-space:normal;word-spacing:0px;text-decoration:none"><div dir="auto" style="overflow-wrap: break-word;"><div style="color:rgb(0,0,0);font-family:Helvetica;font-size:12px;font-style:normal;font-variant-caps:normal;font-weight:normal;letter-spacing:normal;text-align:start;text-indent:0px;text-transform:none;white-space:normal;word-spacing:0px;text-decoration:none">Linda Sandblad, researcher and facility director<br>Umeå Core Facility for Electron Microscopy, SciLifeLab Cryo-EM, NMI<br>Department of Chemistry, Umeå University, Sweden<br>Tel: +46 709324936</div></div></div></div></div>
</div>

<br></div></div></div>_______________________________________________<br>
3dem mailing list<br>
<a href="mailto:3dem@ncmir.ucsd.edu" target="_blank">3dem@ncmir.ucsd.edu</a><br>
<a href="https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem" rel="noreferrer" target="_blank">https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem</a><br>
</blockquote></div><br clear="all"><div><br></div>-- <br><div dir="ltr" class="gmail_signature"><div dir="ltr"><div><div dir="ltr"><div>Amar Parvate<br></div><div>Saphire Lab</div><div>LJI<br></div></div></div></div></div>