<div dir="ltr"><font face="arial, sans-serif">Dear Ferrie,</font><div><font face="arial, sans-serif"><br></font></div><div><font face="arial, sans-serif">The pH of UA is ~4. The common buffer for protein sample is pH ~6-8. Depending on the settings of staining method, the lower pH can be buffered!? Moreover, <span style="color:rgb(0,0,0)">Uranyl acetate  acts as a fixative, preserving many protein-protein interactions on a millisecond time scale. Thus, can you give us some explosion of UA staining affecting the structure? the overall structure or secondary structure?</span></font></div><div><font face="arial, sans-serif"><span style="color:rgb(0,0,0)"><br></span></font></div><div><font color="#000000" face="arial, sans-serif">best,</font></div><div><font color="#000000" face="arial, sans-serif"><br></font></div><div><font color="#000000" face="arial, sans-serif">zhongwu</font></div></div><br><div class="gmail_quote"><div dir="ltr" class="gmail_attr">On Thu, Jun 4, 2020 at 3:34 PM Farzad <<a href="mailto:farzaad@gmail.com">farzaad@gmail.com</a>> wrote:<br></div><blockquote class="gmail_quote" style="margin:0px 0px 0px 0.8ex;border-left:1px solid rgb(204,204,204);padding-left:1ex"><div dir="auto">Dear All,<div dir="auto"><br></div><div dir="auto">The other thing that should be considered is the low pH of UA staining agent. This may affect the structure.</div><div dir="auto"><br></div><div dir="auto">BR</div><div dir="auto"><br></div><div dir="auto">Ferrie</div><div dir="auto"><br></div><div dir="auto"><br></div></div><br><div class="gmail_quote"><div dir="ltr" class="gmail_attr">On Thu, Jun 4, 2020, 22:28 Davide <<a href="mailto:dafloris@biophys.mpg.de" target="_blank">dafloris@biophys.mpg.de</a>> wrote:<br></div><blockquote class="gmail_quote" style="margin:0px 0px 0px 0.8ex;border-left:1px solid rgb(204,204,204);padding-left:1ex"><div style="overflow-wrap: break-word;">Hi Umar<div><br></div><span>you can find very useful advice in our publication:<br></span><span><br></span><span><b>Protein denaturation at the air-water interface and how to prevent it</b><br><br></span><a href="https://urldefense.com/v3/__https://elifesciences.org/articles/42747__;!!Mih3wA!VfLdm8jk1oLaorfhmBpHU8SgDDDqoBFeugRuH6bNfz5IOsbAbVHiBNK7SqXAfdlwNw$" rel="noreferrer" target="_blank">https://elifesciences.org/articles/42747</a><div><span><br></span></div><div><span>Best regards,</span></div><div><span><br></span></div><div><span><br></span></div><div><span>Davide<br></span><span><div>_________________________________________________<br><br>Davide Floris<br>PhD student<br>Max Planck Institute of Biophysics<br>Structural Biology Department<br>Max-von-Laue Straße 3<br>60438 Frankfurt am Main<br>Germany<br><br>(L2.090): +49-69-6303-3037<br>(B2.205): +49-69-6303-3049<br></div><br><blockquote type="cite">On 4. Jun 2020, at 21:24, Umar Farook <<a href="mailto:umarfarook12@gmail.com" rel="noreferrer" target="_blank">umarfarook12@gmail.com</a>> wrote:<br><br>Dear All,<br><br>I would like to ask the community for suggestions on how to overcome the issue of hexamer dissociating while freezing Cryo-EM grids, the negative staining seems to be perfect hexamer at 0.1 mg/ml concentration. But the sample seems to fall apart at 1.5 mg/ml in Cryo freezing, please advise, thank you.<br><br>Best Regards,<br>Umar<br>_______________________________________________<br>3dem mailing list<br><a href="mailto:3dem@ncmir.ucsd.edu" rel="noreferrer" target="_blank">3dem@ncmir.ucsd.edu</a><br><a href="https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem" rel="noreferrer" target="_blank">https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem</a><br></blockquote><br></span></div></div>_______________________________________________<br>
3dem mailing list<br>
<a href="mailto:3dem@ncmir.ucsd.edu" rel="noreferrer" target="_blank">3dem@ncmir.ucsd.edu</a><br>
<a href="https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem" rel="noreferrer noreferrer" target="_blank">https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem</a><br>
</blockquote></div>
_______________________________________________<br>
3dem mailing list<br>
<a href="mailto:3dem@ncmir.ucsd.edu" target="_blank">3dem@ncmir.ucsd.edu</a><br>
<a href="https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem" rel="noreferrer" target="_blank">https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem</a><br>
</blockquote></div>