<html><head>
<meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=iso-8859-1">
<style type="text/css" style="display:none;"> P {margin-top:0;margin-bottom:0;} </style>
</head>
<body dir="ltr">Hi,<br>I would try Quantifoil carbon grids R2/4+ or R3/3+ 2nm additional carbon film. Check allways NS first and then go into cryo. Use 100%humidity and 4C. Blotting only 2 or 4 seconds. If you succeed then you increase the sample concentration by the factor of 10 and freeze 1 or 2sec R1.2/1.3 without carbon. Good luck. I know every grid looks different. Best Jörg.<br><br><div class="gmail_quote">Am 30. März 2020 05:15:26 MESZ schrieb Satoru Machida <dbssator@nus.edu.sg>:<blockquote class="gmail_quote" style="margin: 0pt 0pt 0pt 0.8ex; border-left: 1px solid rgb(204, 204, 204); padding-left: 1ex;">

<div style="font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">
<span><span>Dear all<br>
</span></span></div>
<div style="font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">
<span><span><br>
</span></span></div>
<div style="font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">
<span><span>I prepared cryo grids for single particle analysis for 600 kD protein-RNA complex. The particles are overcrowded. After dilution, the particles are not separated. When I diluted it further, holes became empty. Gel filtration makes a single peak,
 but on the grid they stick together. I already tried glycerol, DMSO, amphipols, salt concentration 70-400 mM. None of them worked well. The buffer contains 150 mM NaCl, 10 mM HEPES pH8, 0.5 mM EDTA, 4 mM DTT. The sample had about 1mg/ml, blotted for 3 sec
 , force 0, 100% humidity, 22C on Ultraufoil R0.6/1.0 coated with graphene-oxide. The image was taken by Tecnai12. The particles are hard to get into the holes without graphene-oxide.</span></span></div>
<div style="font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">
<span><span>Any expert suggestions will be helpful.</span></span></div>
<div style="font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">
<span><span><br>
</span></span></div>
<div style="font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">
<span><span>Kind regards</span></span></div>
<div style="font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">
<span><span>Machida</span></span><br>
</div>
<br>
<hr>
<font face="Arial" color="Black" size="1"><br>
Important: This email is confidential and may be privileged. If you are not the intended recipient, please delete it and notify us immediately; you should not copy or use it for any purpose, nor disclose its contents to any other person. Thank you.<br>
</font>


</blockquote></div><br>-- <br>Diese Nachricht wurde von meinem Android-Gerät mit K-9 Mail gesendet.</body></html>