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<body dir="ltr">
<div style="font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">
Sorry, I should have been more specific: 20% in methanol.<br>
</div>
<div id="appendonsend"></div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif; font-size:12pt; color:rgb(0,0,0)">
<br>
</div>
<hr tabindex="-1" style="display:inline-block; width:98%">
<div id="divRplyFwdMsg" dir="ltr"><font style="font-size:11pt" face="Calibri, sans-serif" color="#000000"><b>From:</b> Gibson, Kimberley <kimberley.gibson@yale.edu><br>
<b>Sent:</b> 19 December 2019 15:08<br>
<b>To:</b> Christopher Peddie <Christopher.Peddie@crick.ac.uk>; Qiaohui Yang <qiaohui.yang@ymail.com><br>
<b>Cc:</b> 3dem@ncmir.ucsd.edu <3dem@ncmir.ucsd.edu><br>
<b>Subject:</b> Re: [3dem] Precipitation observed after making freeze substitution cocktail containing 5% water</font>
<div> </div>
</div>
<div dir="ltr">
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif; font-size:12pt; color:rgb(0,0,0)">
It's not possible to make a stock solution of 20% Uranyl Acetate. Even making a 10% UA stock is not possible. At best, the solubility of UA is around 7-8 % in water. It's best to make a 5% stock solution, dissolved in water, for example, and add the quantity
 of 5%UA to the acetone. The precipitation of UA is likely due to the acetone as UA is not really soluble in acetone. </div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif; font-size:12pt; color:rgb(0,0,0)">
Best,</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif; font-size:12pt; color:rgb(0,0,0)">
<br>
</div>
<div id="x_Signature">
<div dir="ltr" id="x_divtagdefaultwrapper" style="font-size:12pt; color:#000000; background-color:#FFFFFF; font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif">
<div style="font-family:Tahoma; font-size:13px">Kimberley Gibson</div>
<div style="font-family:Tahoma; font-size:13px"><br>
Research Associate, Charles Sindelar Lab<br>
<br>
Dept. Molecular Biophysics and Biochemistry<br>
Yale University<br>
</div>
</div>
</div>
<div id="x_appendonsend"></div>
<hr tabindex="-1" style="display:inline-block; width:98%">
<div id="x_divRplyFwdMsg" dir="ltr"><font style="font-size:11pt" face="Calibri, sans-serif" color="#000000"><b>From:</b> 3dem <3dem-bounces@ncmir.ucsd.edu> on behalf of Christopher Peddie <Christopher.Peddie@crick.ac.uk><br>
<b>Sent:</b> Thursday, December 19, 2019 03:56<br>
<b>To:</b> Qiaohui Yang <qiaohui.yang@ymail.com><br>
<b>Cc:</b> 3dem@ncmir.ucsd.edu <3dem@ncmir.ucsd.edu><br>
<b>Subject:</b> Re: [3dem] Precipitation observed after making freeze substitution cocktail containing 5% water</font>
<div> </div>
</div>
<div lang="EN-GB">
<div class="x_x_WordSection1">
<p class="x_x_MsoNormal" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;margin: 0cm 0cm 0.0001pt; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman", serif;">
<span style="font-size:9.0pt; font-family:"Trebuchet MS",sans-serif">Hi Qiaohui,</span></p>
<p class="x_x_MsoNormal" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;margin: 0cm 0cm 0.0001pt; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman", serif;">
<span style="font-size:9.0pt; font-family:"Trebuchet MS",sans-serif"> </span></p>
<p class="x_x_MsoNormal" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;margin: 0cm 0cm 0.0001pt; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman", serif;">
<span style="font-size:9.0pt; font-family:"Trebuchet MS",sans-serif">Mix the osmium, water and acetone and cool to -20oC. Then add the uranyl acetate from a stock e.g. 20%. Cooling the mixture in my experience stops the uranyl acetate from precipitating out.</span></p>
<p class="x_x_MsoNormal" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;margin: 0cm 0cm 0.0001pt; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman", serif;">
<span style="font-size:9.0pt; font-family:"Trebuchet MS",sans-serif"> </span></p>
<p class="x_x_MsoNormal" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;margin: 0cm 0cm 0.0001pt; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman", serif;">
<span style="font-size:9.0pt; font-family:"Trebuchet MS",sans-serif">Best,</span></p>
<p class="x_x_MsoNormal" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;margin: 0cm 0cm 0.0001pt; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman", serif;">
<span style="font-size:9.0pt; font-family:"Trebuchet MS",sans-serif">Chris</span></p>
<p class="x_x_MsoNormal" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;margin: 0cm 0cm 0.0001pt; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman", serif;">
<span style="font-size:9.0pt; font-family:"Trebuchet MS",sans-serif"> </span></p>
<p class="x_x_MsoNormal" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;margin: 0cm 0cm 0.0001pt; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman", serif;">
<span style="font-size:9.0pt; font-family:"Trebuchet MS",sans-serif"> </span></p>
<div>
<div style="border:none; border-top:solid #E1E1E1 1.0pt; padding:3.0pt 0cm 0cm 0cm">
<p class="x_x_MsoNormal" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;margin: 0cm 0cm 0.0001pt; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman", serif;">
<b><span style="font-size:11.0pt; font-family:"Calibri",sans-serif" lang="EN-US">From:</span></b><span style="font-size:11.0pt; font-family:"Calibri",sans-serif" lang="EN-US"> 3dem [mailto:3dem-bounces@ncmir.ucsd.edu]
<b>On Behalf Of </b>Qiaohui Yang<br>
<b>Sent:</b> 19 December 2019 08:39<br>
<b>To:</b> <br>
<b>Subject:</b> [3dem] Precipitation observed after making freeze substitution cocktail containing 5% water</span></p>
</div>
</div>
<p class="x_x_MsoNormal" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;margin: 0cm 0cm 0.0001pt; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman", serif;">
 </p>
<div>
<div>
<div>
<p class="x_x_ydp8b0c7ddbmsonormal" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;margin-right: 0cm; margin-left: 0cm; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman", serif;">
<span style="font-size:10.0pt">Hi everyone!</span></p>
<div>
<p class="x_x_MsoNormal" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;margin: 0cm 0cm 0.0001pt; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman", serif;">
<span style="font-size:10.0pt">We recently tried to make freeze substitution cocktail consisting of 1% osmium tetroxide, 0.1% uranyl acetate and 5% water but observed that the mixture turned slightly cloudy within 1-2 minutes. We tried to see if the precipitation
 would occur in the absence of osmium tetroxide, and we observed some cloudiness too after mixing uranyl acetate solution in water with pure acetone.</span></p>
</div>
<p class="x_x_ydp8b0c7ddbmsonormal" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;margin-right: 0cm; margin-left: 0cm; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman", serif;">
<span style="font-size:10.0pt">Just wondering if anyone has encountered similar problem and if so, would appreciate some tips on how to overcome this problem.</span></p>
<p class="x_x_ydp8b0c7ddbmsonormal" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;margin-right: 0cm; margin-left: 0cm; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman", serif;">
<span style="font-size:10.0pt">Thank you!</span></p>
<p class="x_x_ydp8b0c7ddbmsonormal" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;margin-right: 0cm; margin-left: 0cm; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman", serif;">
<span style="font-size:10.0pt"> </span></p>
<p class="x_x_ydp8b0c7ddbmsonormal" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;margin-right: 0cm; margin-left: 0cm; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman", serif;">
<span style="font-size:10.0pt">Best regards,</span></p>
<p class="x_x_ydp8b0c7ddbmsonormal" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;margin-right: 0cm; margin-left: 0cm; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman", serif;">
<span style="font-size:10.0pt">Qiaohui</span></p>
</div>
<p class="x_x_MsoNormal" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;margin: 0cm 0cm 0.0001pt; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman", serif;">
<span style="font-size:10.0pt"> </span></p>
</div>
</div>
</div>
<p style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;color:rgb(112,113,115); font-family:'Trebuchet MS','Lucida Grande'; font-style:italic; font-size:10pt">
The Francis Crick Institute Limited is a registered charity in England and Wales no. 1140062 and a company registered in England and Wales no. 06885462, with its registered office at 1 Midland Road London NW1 1AT</p>
</div>
</div>
<p style="color:rgb(112,113,115);font-family: 'Trebuchet MS', 'Lucida Grande'; font-style: italic; font-size: 10pt;">
The Francis Crick Institute Limited is a registered charity in England and Wales no. 1140062 and a company registered in England and Wales no. 06885462, with its registered office at 1 Midland Road London NW1 1AT</p>
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