
<html>

<head>

<meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=Windows-1252">

</head>

<body style="word-wrap: break-word; -webkit-nbsp-mode: space; -webkit-line-break: after-white-space;" class="">

<style type="text/css" style="display:none;"><!-- P {margin-top:0;margin-bottom:0;} --></style>

<div id="divtagdefaultwrapper" style="font-size:12pt;color:#000000;font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;" dir="ltr">

<p>Dear Teige,</p>

<p><br>

</p>

<p>what is it that you want to image?. Dehydration destroys the fluorescence of fluorescent proteins.</p>

<p>Some fluorescent compounds like DAPI are destroyed by Uranyl Acetate.</p>

<p>If cells are attached to the grid under hydrated conditions then it can be possible to preserve their position after dehydration/negative staining and then perform CLEM.</p>

<p><br>

</p>

<p>Best,</p>

<p><br>

</p>

<p>Jaime Llodra<br>

</p>

<p><br>

</p>

<p><br>

</p>

</div>

<hr style="display:inline-block;width:98%" tabindex="-1">

<div id="divRplyFwdMsg" dir="ltr"><font face="Calibri, sans-serif" style="font-size:11pt" color="#000000"><b>Von:</b> 3dem <3dem-bounces@ncmir.ucsd.edu> im Auftrag von Matthews-Palmer, Teige Rowan Seal <t.matthews-palmer14@imperial.ac.uk><br>

<b>Gesendet:</b> Dienstag, 25. September 2018 15:12:12<br>

<b>An:</b> 3dem@ncmir.ucsd.edu<br>

<b>Betreff:</b> [3dem] Neg-stain CLEM?</font>

<div> </div>

</div>

<div>Dear 3DEMers,

<div class=""><br class="">

</div>

<div class="">I’d be interested to hear from anyone who has tried, in the absence of a CLEM cryostage, to correlate objects between fluorescent light microscopy and

<b class="">negative-stain</b> TEM.</div>

<div class="">Any success avoiding complete rearrangement / breaking on removing a coverslip from an EM grid?</div>

<div class="">Or any success getting a fluorescent signal out from underneath a dried coat of stain…?</div>

<div class="">Since this is for a bacterial suspension, negative stain is an obvious, but perhaps not the best fixation method.</div>

<div class=""><br class="">

</div>

<div class="">Thanks for any info.</div>

<div class="">All the best</div>

<div class="">Teige</div>

<div class=""><br class="">

</div>

</div>

</body>

</html>