<html xmlns:v="urn:schemas-microsoft-com:vml" xmlns:o="urn:schemas-microsoft-com:office:office" xmlns:w="urn:schemas-microsoft-com:office:word" xmlns:x="urn:schemas-microsoft-com:office:excel" xmlns:m="http://schemas.microsoft.com/office/2004/12/omml" xmlns="http://www.w3.org/TR/REC-html40">
<head>
<meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=iso-8859-1">
<meta name="ProgId" content="Word.Document">
<meta name="Generator" content="Microsoft Word 14">
<meta name="Originator" content="Microsoft Word 14">
<link rel="File-List" href="cid:filelist.xml@01D34754.58D1B640"><!--[if gte mso 9]><xml>
<o:OfficeDocumentSettings>
<o:AllowPNG/>
<o:DoNotRelyOnCSS/>
</o:OfficeDocumentSettings>
</xml><![endif]--><!--[if gte mso 9]><xml>
<w:WordDocument>
<w:Zoom>130</w:Zoom>
<w:SpellingState>Clean</w:SpellingState>
<w:TrackMoves/>
<w:TrackFormatting/>
<w:EnvelopeVis/>
<w:ValidateAgainstSchemas/>
<w:SaveIfXMLInvalid>false</w:SaveIfXMLInvalid>
<w:IgnoreMixedContent>false</w:IgnoreMixedContent>
<w:AlwaysShowPlaceholderText>false</w:AlwaysShowPlaceholderText>
<w:DoNotPromoteQF/>
<w:LidThemeOther>EN-US</w:LidThemeOther>
<w:LidThemeAsian>X-NONE</w:LidThemeAsian>
<w:LidThemeComplexScript>X-NONE</w:LidThemeComplexScript>
<w:Compatibility>
<w:DoNotExpandShiftReturn/>
<w:BreakWrappedTables/>
<w:SplitPgBreakAndParaMark/>
<w:EnableOpenTypeKerning/>
</w:Compatibility>
<m:mathPr>
<m:mathFont m:val="Cambria Math"/>
<m:brkBin m:val="before"/>
<m:brkBinSub m:val="--"/>
<m:smallFrac m:val="off"/>
<m:dispDef/>
<m:lMargin m:val="0"/>
<m:rMargin m:val="0"/>
<m:defJc m:val="centerGroup"/>
<m:wrapIndent m:val="1440"/>
<m:intLim m:val="subSup"/>
<m:naryLim m:val="undOvr"/>
</m:mathPr></w:WordDocument>
</xml><![endif]--><!--[if gte mso 9]><xml>
<w:LatentStyles DefLockedState="false" DefUnhideWhenUsed="true" DefSemiHidden="true" DefQFormat="false" DefPriority="99" LatentStyleCount="267">
<w:LsdException Locked="false" Priority="0" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" QFormat="true" Name="Normal"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="9" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" QFormat="true" Name="heading 1"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="9" QFormat="true" Name="heading 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="9" QFormat="true" Name="heading 3"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="9" QFormat="true" Name="heading 4"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="9" QFormat="true" Name="heading 5"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="9" QFormat="true" Name="heading 6"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="9" QFormat="true" Name="heading 7"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="9" QFormat="true" Name="heading 8"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="9" QFormat="true" Name="heading 9"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="39" Name="toc 1"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="39" Name="toc 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="39" Name="toc 3"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="39" Name="toc 4"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="39" Name="toc 5"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="39" Name="toc 6"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="39" Name="toc 7"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="39" Name="toc 8"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="39" Name="toc 9"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="35" QFormat="true" Name="caption"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="10" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" QFormat="true" Name="Title"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="1" Name="Default Paragraph Font"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="11" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" QFormat="true" Name="Subtitle"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="22" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" QFormat="true" Name="Strong"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="20" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" QFormat="true" Name="Emphasis"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="59" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Table Grid"/>
<w:LsdException Locked="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Placeholder Text"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="1" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" QFormat="true" Name="No Spacing"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="60" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light Shading"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="61" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light List"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="62" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light Grid"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="63" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Shading 1"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="64" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Shading 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="65" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium List 1"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="66" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium List 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="67" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 1"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="68" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="69" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 3"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="70" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Dark List"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="71" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful Shading"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="72" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful List"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="73" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful Grid"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="60" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light Shading Accent 1"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="61" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light List Accent 1"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="62" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light Grid Accent 1"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="63" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Shading 1 Accent 1"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="64" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Shading 2 Accent 1"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="65" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium List 1 Accent 1"/>
<w:LsdException Locked="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Revision"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="34" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" QFormat="true" Name="List Paragraph"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="29" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" QFormat="true" Name="Quote"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="30" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" QFormat="true" Name="Intense Quote"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="66" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium List 2 Accent 1"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="67" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 1 Accent 1"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="68" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 2 Accent 1"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="69" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 3 Accent 1"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="70" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Dark List Accent 1"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="71" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful Shading Accent 1"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="72" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful List Accent 1"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="73" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful Grid Accent 1"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="60" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light Shading Accent 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="61" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light List Accent 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="62" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light Grid Accent 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="63" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Shading 1 Accent 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="64" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Shading 2 Accent 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="65" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium List 1 Accent 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="66" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium List 2 Accent 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="67" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 1 Accent 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="68" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 2 Accent 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="69" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 3 Accent 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="70" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Dark List Accent 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="71" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful Shading Accent 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="72" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful List Accent 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="73" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful Grid Accent 2"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="60" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light Shading Accent 3"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="61" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light List Accent 3"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="62" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light Grid Accent 3"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="63" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Shading 1 Accent 3"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="64" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Shading 2 Accent 3"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="65" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium List 1 Accent 3"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="66" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium List 2 Accent 3"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="67" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 1 Accent 3"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="68" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 2 Accent 3"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="69" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 3 Accent 3"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="70" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Dark List Accent 3"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="71" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful Shading Accent 3"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="72" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful List Accent 3"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="73" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful Grid Accent 3"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="60" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light Shading Accent 4"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="61" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light List Accent 4"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="62" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light Grid Accent 4"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="63" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Shading 1 Accent 4"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="64" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Shading 2 Accent 4"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="65" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium List 1 Accent 4"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="66" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium List 2 Accent 4"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="67" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 1 Accent 4"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="68" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 2 Accent 4"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="69" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 3 Accent 4"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="70" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Dark List Accent 4"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="71" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful Shading Accent 4"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="72" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful List Accent 4"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="73" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful Grid Accent 4"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="60" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light Shading Accent 5"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="61" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light List Accent 5"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="62" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light Grid Accent 5"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="63" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Shading 1 Accent 5"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="64" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Shading 2 Accent 5"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="65" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium List 1 Accent 5"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="66" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium List 2 Accent 5"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="67" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 1 Accent 5"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="68" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 2 Accent 5"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="69" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 3 Accent 5"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="70" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Dark List Accent 5"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="71" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful Shading Accent 5"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="72" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful List Accent 5"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="73" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful Grid Accent 5"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="60" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light Shading Accent 6"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="61" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light List Accent 6"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="62" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Light Grid Accent 6"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="63" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Shading 1 Accent 6"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="64" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Shading 2 Accent 6"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="65" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium List 1 Accent 6"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="66" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium List 2 Accent 6"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="67" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 1 Accent 6"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="68" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 2 Accent 6"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="69" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Medium Grid 3 Accent 6"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="70" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Dark List Accent 6"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="71" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful Shading Accent 6"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="72" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful List Accent 6"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="73" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" Name="Colorful Grid Accent 6"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="19" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" QFormat="true" Name="Subtle Emphasis"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="21" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" QFormat="true" Name="Intense Emphasis"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="31" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" QFormat="true" Name="Subtle Reference"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="32" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" QFormat="true" Name="Intense Reference"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="33" SemiHidden="false" UnhideWhenUsed="false" QFormat="true" Name="Book Title"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="37" Name="Bibliography"/>
<w:LsdException Locked="false" Priority="39" QFormat="true" Name="TOC Heading"/>
</w:LatentStyles>
</xml><![endif]--><style><!--
/* Font Definitions */
@font-face
        {font-family:Calibri;
        panose-1:2 15 5 2 2 2 4 3 2 4;
        mso-font-charset:0;
        mso-generic-font-family:swiss;
        mso-font-pitch:variable;
        mso-font-signature:-536870145 1073786111 1 0 415 0;}
@font-face
        {font-family:Tahoma;
        panose-1:2 11 6 4 3 5 4 4 2 4;
        mso-font-charset:0;
        mso-generic-font-family:swiss;
        mso-font-pitch:variable;
        mso-font-signature:-520081665 -1073717157 41 0 66047 0;}
/* Style Definitions */
p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal
        {mso-style-unhide:no;
        mso-style-qformat:yes;
        mso-style-parent:"";
        margin:0in;
        margin-bottom:.0001pt;
        mso-pagination:widow-orphan;
        font-size:12.0pt;
        font-family:"Times New Roman","serif";
        mso-fareast-font-family:Calibri;}
a:link, span.MsoHyperlink
        {mso-style-noshow:yes;
        mso-style-priority:99;
        color:blue;
        text-decoration:underline;
        text-underline:single;}
a:visited, span.MsoHyperlinkFollowed
        {mso-style-noshow:yes;
        mso-style-priority:99;
        color:purple;
        text-decoration:underline;
        text-underline:single;}
span.xapple-converted-space
        {mso-style-name:x_apple-converted-space;
        mso-style-unhide:no;}
span.EmailStyle18
        {mso-style-type:personal-reply;
        mso-style-noshow:yes;
        mso-style-unhide:no;
        mso-ansi-font-size:12.0pt;
        mso-bidi-font-size:11.0pt;
        font-family:"Calibri","sans-serif";
        mso-ascii-font-family:Calibri;
        mso-hansi-font-family:Calibri;
        mso-bidi-font-family:"Times New Roman";
        color:#1F497D;}
span.SpellE
        {mso-style-name:"";
        mso-spl-e:yes;}
.MsoChpDefault
        {mso-style-type:export-only;
        mso-default-props:yes;
        font-size:10.0pt;
        mso-ansi-font-size:10.0pt;
        mso-bidi-font-size:10.0pt;}
@page WordSection1
        {size:8.5in 11.0in;
        margin:1.0in 1.0in 1.0in 1.0in;
        mso-header-margin:.5in;
        mso-footer-margin:.5in;
        mso-paper-source:0;}
div.WordSection1
        {page:WordSection1;}
--></style><!--[if gte mso 10]><style>/* Style Definitions */
table.MsoNormalTable
        {mso-style-name:"Table Normal";
        mso-tstyle-rowband-size:0;
        mso-tstyle-colband-size:0;
        mso-style-noshow:yes;
        mso-style-priority:99;
        mso-style-parent:"";
        mso-padding-alt:0in 5.4pt 0in 5.4pt;
        mso-para-margin:0in;
        mso-para-margin-bottom:.0001pt;
        mso-pagination:widow-orphan;
        font-size:10.0pt;
        font-family:"Times New Roman","serif";}
</style><![endif]--><!--[if gte mso 9]><xml>
<o:shapedefaults v:ext="edit" spidmax="1026" />
</xml><![endif]--><!--[if gte mso 9]><xml>
<o:shapelayout v:ext="edit">
<o:idmap v:ext="edit" data="1" />
</o:shapelayout></xml><![endif]-->
</head>
<body lang="EN-US" link="blue" vlink="purple" style="tab-interval:.5in">
<div class="WordSection1">
<p class="MsoNormal"><font size="3" color="#1f497d" face="Calibri"><span style="font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:11.0pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-bidi-font-family:"Times New Roman";color:#1F497D">Sometimes including ~1 %
<span style="mso-spacerun:yes"> </span><span class="SpellE">Acrolein</span> in the fixative can improve fixation (typically 3% formaldehyde, 1-2% glutaraldehyde, 1%
<span class="SpellE">Acrolein</span>).<span style="mso-spacerun:yes">  </span><span class="SpellE">Acrolein</span> penetrates very fast and is a strong
<span class="SpellE">crosslinker</span>. <span style="mso-spacerun:yes"> </span>I have also seen DMSO (~5%) included in the fixative to improve penetration.
<o:p></o:p></span></font></p>
<p class="MsoNormal"><font size="3" color="#1f497d" face="Calibri"><span style="font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:11.0pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-bidi-font-family:"Times New Roman";color:#1F497D">I have used Malachite Green in fixatives for
 TEM sample prep for fatty issues; it<span style="mso-spacerun:yes">  </span>is supposed to stain/stabilize lipids.
<span style="mso-spacerun:yes"> </span><o:p></o:p></span></font></p>
<p class="MsoNormal"><font size="3" color="#1f497d" face="Calibri"><span style="font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:11.0pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-bidi-font-family:"Times New Roman";color:#1F497D"><span style="mso-spacerun:yes"> </span><o:p></o:p></span></font></p>
<p class="MsoNormal"><font size="3" color="#1f497d" face="Calibri"><span style="font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:11.0pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-bidi-font-family:"Times New Roman";color:#1F497D">Using a microwave processor (we have a
<span class="SpellE">Pelco</span> <span class="SpellE">Biowave</span>; no commercial interest) for fixation and subsequent steps can also improve the quality of prep.
<o:p></o:p></span></font></p>
<p class="MsoNormal"><font size="3" color="#1f497d" face="Calibri"><span style="font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:11.0pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-bidi-font-family:"Times New Roman";color:#1F497D"><o:p> </o:p></span></font></p>
<p class="MsoNormal"><font size="3" color="#1f497d" face="Calibri"><span style="font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:11.0pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-bidi-font-family:"Times New Roman";color:#1F497D">We have new
<span style="mso-spacerun:yes"> </span>HPF and freeze substitution instruments<span style="mso-spacerun:yes"> 
</span>but so far I have used them for bacteria and yeast only so I cannot provide side by side comparison for other samples.<o:p></o:p></span></font></p>
<p class="MsoNormal"><font size="3" color="#1f497d" face="Calibri"><span style="font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:11.0pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-bidi-font-family:"Times New Roman";color:#1F497D"><o:p> </o:p></span></font></p>
<p class="MsoNormal"><font size="3" color="#1f497d" face="Calibri"><span style="font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:11.0pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-bidi-font-family:"Times New Roman";color:#1F497D">Stan Vitha<o:p></o:p></span></font></p>
<p class="MsoNormal"><font size="2" color="#1f497d" face="Tahoma"><span style="font-size:10.0pt;font-family:"Tahoma","sans-serif";mso-fareast-font-family:"Times New Roman";color:#1F497D;mso-no-proof:yes">Microscopy and Imaging Center<span style="mso-spacerun:yes"> 
</span><br>
Texas A&M University <o:p></o:p></span></font></p>
<p class="MsoNormal"><font size="2" color="#1f497d" face="Calibri"><span style="font-size:11.0pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-fareast-font-family:"Times New Roman";mso-bidi-font-family:"Times New Roman";color:#1F497D;mso-no-proof:yes">http://microscopy.tamu.edu<br style="mso-special-character:line-break">
<![if !supportLineBreakNewLine]><br style="mso-special-character:line-break">
<![endif]></span></font><font color="#1f497d" face="Calibri"><span style="mso-bidi-font-size:11.0pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-bidi-font-family:"Times New Roman";color:#1F497D"><o:p></o:p></span></font></p>
<div style="border:none;border-left:solid blue 1.5pt;padding:0in 0in 0in 4.0pt">
<div>
<div style="border:none;border-top:solid #B5C4DF 1.0pt;padding:3.0pt 0in 0in 0in">
<p class="MsoNormal"><b><font size="2" face="Tahoma"><span style="font-size:10.0pt;font-family:"Tahoma","sans-serif";mso-fareast-font-family:"Times New Roman";font-weight:bold">From:</span></font></b><font size="2" face="Tahoma"><span style="font-size:10.0pt;font-family:"Tahoma","sans-serif";mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">
 3dem [mailto:3dem-bounces@ncmir.ucsd.edu] <b><span style="font-weight:bold">On Behalf Of
</span></b>Riedel, Dietmar<br>
<b><span style="font-weight:bold">Sent:</span></b> Tuesday, October 17, 2017 8:59 AM<br>
<b><span style="font-weight:bold">To:</span></b> Paul Verkade<br>
<b><span style="font-weight:bold">Cc:</span></b> 3dem@ncmir.ucsd.edu<br>
<b><span style="font-weight:bold">Subject:</span></b> Re: [3dem] fixation of dense core granules for immune-EM<o:p></o:p></span></font></p>
</div>
</div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt"><o:p> </o:p></span></font></p>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><br>
Hi Qiu-Xing, <o:p></o:p></span></font></p>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">I agree totally with Paul. HPF is the appropriate Methode to use. Beside I embedded long time ago several pancreas samples using
 2.5% glutharaldehyde in 0.1M caccodylic buffer pH 7.1. Fixation was performed at +4*C over night. This worked quite well for pancreas as well as for langerhans islands.<o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">Regards<o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">Dietmar<o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">———————————/——<o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">Riedel Dietmar <o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">MPI for biophys. Chemistry<o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">Göttingen<o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><o:p> </o:p></span></font></p>
<div id="AppleMailSignature">
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">Mobil gesendet<o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal" style="margin-bottom:12.0pt"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><br>
Am 17.10.2017 um 15:36 schrieb Paul Verkade <<a href="mailto:P.Verkade@bristol.ac.uk">P.Verkade@bristol.ac.uk</a>>:<o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<blockquote style="margin-top:5.0pt;margin-bottom:5.0pt">
<div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">Hi Qiu-Xing,
<o:p></o:p></span></font></p>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><o:p> </o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">That is indeed a known problem. Have you tried High Pressure Freezing followed by freeze substitution? This worked very well
 for us, see attached paper:<o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">Do let me know if you have any questions about the procedure.<o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><o:p> </o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">Best regards,<o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">Paul<o:p></o:p></span></font></p>
<div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">__________________________________<br>
Paul Verkade PhD FRMS<br>
Professor of Bioimaging<br>
Wolfson Bioimaging Facility<br>
School of Biochemistry<br>
Biomedical Sciences Building<br>
University of Bristol<br>
University Walk<br>
BS8 1TD Bristol<br>
United Kingdom<br>
<br>
tel.+44-117-3312179<br>
Fax. +44-117-3312168<br>
mail: <a href="mailto:p.verkade@bristol.ac.uk">p.verkade@bristol.ac.uk</a><br>
websites:<br>
<a href="https://urldefense.proofpoint.com/v2/url?u=http-3A__www.bristol.ac.uk_biochemistry_research_pv.html&d=DwMF-g&c=ODFT-G5SujMiGrKuoJJjVg&r=tE-7MR_zhznDCk27UIOmF3KCvigbMQUT9WjrucIisxY&m=pNPX19hrP46K3F8JinGdb_5wh2XHpZyZVHDp7B0stNw&s=joI1uDpkrxcJfkgdOTjAFi8rq4VFIoSjkZylShyrLVA&e=">http://www.bristol.ac.uk/biochemistry/research/pv.html</a><br>
<a href="https://urldefense.proofpoint.com/v2/url?u=http-3A__www.bristol.ac.uk_biochemistry_wbif&d=DwMF-g&c=ODFT-G5SujMiGrKuoJJjVg&r=tE-7MR_zhznDCk27UIOmF3KCvigbMQUT9WjrucIisxY&m=pNPX19hrP46K3F8JinGdb_5wh2XHpZyZVHDp7B0stNw&s=LgCTKmYDcUzcm3RTGgHAnPyzCAL7pO9Fs6zVDSpxZMA&e=">http://www.bristol.ac.uk/biochemistry/wbif</a><br>
<br>
A top 5 UK university with leading employers (2015)<br>
A top 5 UK university for research (2014 REF)<br>
A world top 40 university (QS Ranking 2015)<o:p></o:p></span></font></p>
</div>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><o:p> </o:p></span></font></p>
</div>
</div>
</div>
<div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><o:p> </o:p></span></font></p>
<div>
<blockquote style="margin-top:5.0pt;margin-bottom:5.0pt">
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">On 17 Oct 2017, at 13:19, Jiang,Qiu-Xing <<a href="mailto:qxjiang@ufl.edu">qxjiang@ufl.edu</a>> wrote:<o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><o:p> </o:p></span></font></p>
<div>
<div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="2" face="Calibri"><span style="font-size:10.5pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">Dear all, <o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="2" face="Calibri"><span style="font-size:10.5pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><o:p> </o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="2" face="Calibri"><span style="font-size:10.5pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">Recently scientists at our facility used a standard fixation/embedding protocol to process insulin-secreting
 cells in order to preserve the secretory granules (SGs) inside them. Even though most intracellular organelles and structures are pretty well preserved, the preservation of the SG's was very poor and almost all granules were lost, leaving empty space filled
 with embedding resin. The SG's are known to have very tight membranes, which likely caused the problem. While different protocols are being tested, I am writing to seek some advice from those who might have encountered similar technical issues, and are willing
 to share their solutions. If so, please email me at<span class="xapple-converted-space"> </span><a href="mailto:qxjiang@ufl.edu"><font color="purple"><span style="color:purple">qxjiang@ufl.edu</span></font></a>. Thanks in advance. <o:p></o:p></span></font></p>
</div>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="2" face="Calibri"><span style="font-size:10.5pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><o:p> </o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="2" face="Calibri"><span style="font-size:10.5pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">Qiu-Xing<o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="2" face="Calibri"><span style="font-size:10.5pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">—<o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="2" face="Calibri"><span style="font-size:10.5pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><o:p> </o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<div>
<p class="MsoNormal"><b><font size="5" color="#2f5496" face="Times New Roman"><span style="font-size:16.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman";color:#2F5496;font-weight:bold">Qiu-Xing Jiang, Ph.D.</span></font></b><font size="2"><span style="font-size:11.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><i><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman";font-style:italic">Department Microbiology & Cell Science at UF IFAS </span></font></i><font size="2"><span style="font-size:11.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><i><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman";font-style:italic">Electron Microscopy Faculty Director at UF ICBR</span></font></i><font size="2"><span style="font-size:11.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="2" face="Times New Roman"><span style="font-size:11.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">PO Box 110700 | 1355 Museum Drive, Rms 1298 or 1003, Gainesville, FL 32611-0700 USA<o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="2" face="Times New Roman"><span style="font-size:11.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><a href="https://urldefense.proofpoint.com/v2/url?u=https-3A__www.biotech.ufl.edu_&d=DwMF-g&c=ODFT-G5SujMiGrKuoJJjVg&r=tE-7MR_zhznDCk27UIOmF3KCvigbMQUT9WjrucIisxY&m=pNPX19hrP46K3F8JinGdb_5wh2XHpZyZVHDp7B0stNw&s=PdFaYS_Ps6Po0Q7cUZmfUdOH_ngM29-rqITd_N-J2pk&e="><font color="#954f72"><span style="color:#954F72">Biotech.ufl.edu</span></font></a> |
 Tel: 352.846.0953| Fax: 352.392.5933 |E-mail: <a href="mailto:qxjiang@ufl.edu"><font color="#954f72"><span style="color:#954F72">qxjiang@ufl.edu</span></font></a><o:p></o:p></span></font></p>
</div>
<div>
<p class="MsoNormal"><b><font size="5" color="#1f4e79" face="Times New Roman"><span style="font-size:16.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman";color:#1F4E79;font-weight:bold"><0D571167-8F2C-44BC-A5F0-D789C9297B6C[64].png></span></font></b><font size="2"><span style="font-size:11.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><o:p></o:p></span></font></p>
</div>
</div>
</div>
</div>
<p class="MsoNormal"><font size="2" face="Calibri"><span style="font-size:10.5pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">_______________________________________________<br>
3dem mailing list<br>
</span></font><span style="mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><a href="mailto:3dem@ncmir.ucsd.edu"><font size="2" color="purple" face="Calibri"><span style="font-size:10.5pt;font-family:"Calibri","sans-serif";color:purple">3dem@ncmir.ucsd.edu</span></font></a></span><font size="2" face="Calibri"><span style="font-size:10.5pt;font-family:"Calibri","sans-serif";mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><br>
</span></font><span style="mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><a href="https://urldefense.proofpoint.com/v2/url?u=https-3A__mail.ncmir.ucsd.edu_mailman_listinfo_3dem&d=DwMF-g&c=ODFT-G5SujMiGrKuoJJjVg&r=tE-7MR_zhznDCk27UIOmF3KCvigbMQUT9WjrucIisxY&m=pNPX19hrP46K3F8JinGdb_5wh2XHpZyZVHDp7B0stNw&s=9jiq0lFseW6mVDpOrrqI5nE3i4dN3yFJTukyaMMWNSQ&e="><font size="2" color="purple" face="Calibri"><span style="font-size:10.5pt;font-family:"Calibri","sans-serif";color:purple">https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem</span></font></a><o:p></o:p></span></p>
</div>
</blockquote>
</div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><o:p> </o:p></span></font></p>
</div>
</div>
</div>
</blockquote>
<blockquote style="margin-top:5.0pt;margin-bottom:5.0pt">
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman""><2012-Fava-Diabetologia.pdf><o:p></o:p></span></font></p>
</div>
</blockquote>
<blockquote style="margin-top:5.0pt;margin-bottom:5.0pt">
<div>
<p class="MsoNormal"><font size="3" face="Times New Roman"><span style="font-size:12.0pt;mso-fareast-font-family:"Times New Roman"">_______________________________________________<br>
3dem mailing list<br>
<a href="mailto:3dem@ncmir.ucsd.edu">3dem@ncmir.ucsd.edu</a><br>
<a href="https://urldefense.proofpoint.com/v2/url?u=https-3A__mail.ncmir.ucsd.edu_mailman_listinfo_3dem&d=DwMF-g&c=ODFT-G5SujMiGrKuoJJjVg&r=tE-7MR_zhznDCk27UIOmF3KCvigbMQUT9WjrucIisxY&m=pNPX19hrP46K3F8JinGdb_5wh2XHpZyZVHDp7B0stNw&s=9jiq0lFseW6mVDpOrrqI5nE3i4dN3yFJTukyaMMWNSQ&e=">https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem</a><o:p></o:p></span></font></p>
</div>
</blockquote>
</div>
</div>
</div>
</body>
</html>