<div dir="auto">I always filter my UA. 22um seems to work.<div dir="auto">Kenton </div></div><div class="gmail_extra"><br><div class="gmail_quote">On 25 Sep 2017 10:27, "Reinhard Rachel" <<a href="mailto:Reinhard.Rachel@biologie.uni-regensburg.de">Reinhard.Rachel@biologie.uni-regensburg.de</a>> wrote:<br type="attribution"><blockquote class="gmail_quote" style="margin:0 0 0 .8ex;border-left:1px #ccc solid;padding-left:1ex">Dear Linda,<br>
besides the points discussed already, I am curious to learn why you use copper<br>
grids with formvar, instead of using grids purely coated with carbon films<br>
(prepared by evaporation onto mica, floating off, and then depositing the<br>
c-film onto the grids). Formvar can be nice, can be nasty.<br>
Second, I wonder whether it is your sample what we are looking at. Does it<br>
contain "phosphate-containing compounds" like PBS, ribosomes or remnants, etc<br>
etc? all PO4-containing substances - bio or not bio - will "attract"<br>
Uranylacetate. Many carboxyl-groups do attract Uranylacetate. Think about the<br>
positive staining effect of DNA, ribosomes, P-lipid-membranes, etc etc.<br>
How "pure" is the sample? What is the pH of the sample? and did you wash for a<br>
fraction of a second with bi-distilled water? we often do this - and hope the<br>
best that the sample survives. It may help.<br>
just my 2 cents ... kind regards - Reinhard<br>
 ============================<br>
<br>
> I believe its your stain precipitate . I too had this problem once (my UA<br>
> was old). I used a mild centrifuge rotation and took the supernatant for<br>
> staining and it worked. I hope this will solve your issue.<br>
><br>
> Regards,<br>
><br>
> Subhomoi B.<br>
><br>
> On Mon, Sep 25, 2017 at 12:31 PM, Johanna Höög <<a href="mailto:johanna.hoog@gu.se">johanna.hoog@gu.se</a>> wrote:<br>
><br>
>> Hej Linda!<br>
>><br>
>><br>
>><br>
>> I had similar precipitates a while ago and it took me forever to find the<br>
>> source. For us, it was that the oil filter on the glow discharger that<br>
>> needed to be changed. Try just putting an empty grid in the glow<br>
discharger<br>
>> and then have a look at it to exclude this possibility.<br>
>><br>
>><br>
>><br>
>> Good luck!<br>
>><br>
>><br>
>><br>
>> Johanna<br>
>><br>
>><br>
>><br>
>> *From: *3dem <<a href="mailto:3dem-bounces@ncmir.ucsd.edu">3dem-bounces@ncmir.ucsd.edu</a>> on behalf of Linda Sandblad <<br>
>> <a href="mailto:linda.sandblad@umu.se">linda.sandblad@umu.se</a>><br>
>> *Date: *Sunday 24 September 2017 23:27<br>
>> *To: *"<a href="mailto:3dem@ncmir.ucsd.edu">3dem@ncmir.ucsd.edu</a>" <<a href="mailto:3dem@ncmir.ucsd.edu">3dem@ncmir.ucsd.edu</a>><br>
>> *Subject: *[3dem] negative staining artifact<br>
>><br>
>><br>
>><br>
>> Hi all experts!!<br>
>><br>
>> I know, this do not look nice, but I would like to hear your opinion about<br>
>> this artifact. Tiny dark spots covering both sample and background, do you<br>
>> know what it is, were it comes from and how to avoid it? We have this bad<br>
>> background time to time from different labs…. It is a “normal” negative<br>
>> staining protocol: copper grids, formvar, carbon, glow discharge, UA.<br>
>><br>
>> I’m happy for your suggestions, Best Linda<br>
<br>
<br>
______________________________<wbr>_________________<br>
3dem mailing list<br>
<a href="mailto:3dem@ncmir.ucsd.edu">3dem@ncmir.ucsd.edu</a><br>
<a href="https://mail.ncmir.ucsd.edu/mailman/listinfo/3dem" rel="noreferrer" target="_blank">https://mail.ncmir.ucsd.edu/<wbr>mailman/listinfo/3dem</a><br>
</blockquote></div></div>